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本制品是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组DNA污染的反转录预混Mix。5×Quicking RT SuperMix中不但含有RT-PCR中反转录反应所需的所有试剂（Quicking RT Enzyme、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT primer、dNTP Mixture、反应Buffer），还含有高效去除基因组DNA的热敏gDNase，使得RNA中残留基因组的去除与反转录反应同时进行，方便反转录操作。此外，热敏的gDNase生效快，效率高，作用时间短，在处理残留基因组DNA之后不会对cDNA造成影响。

本制品所含的高效反转录酶Quicking RT Enzyme，是通过分子改造后的新型反转录酶，特别增加了疏水motif，具有更强的RNA亲和性和热稳定性，从而进一步提高了其反转录效率和反应速率，42℃、15min即可完成cDNA第一链的合成。另外，由于新型酶与RNA亲和力的增强，使其在通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板和抗逆性等方面的表现也更为的突出。

• 体系配制简单：本制品为预混Mix形式，只需加入模板RNA和水便可以进行反应。
  
• 反转录效率高：反转录效率可达95%以上。
  
• 反转录速度快：只需42℃，15min即可完成cDNA第一链的合成，同时去除残留DNA。
  
• 通读复杂模板：能够作用于GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。
  
• 后续兼容性好：后续配合荧光定量检测产品，灵敏度高、稳定性好。

RT-PCR；荧光定量RT-PCR；cDNA文库构建；SAGE(基因表达连续分析)；引物延伸。



分别使用我公司5×Quicking RT SuperMix(货号：WH0235)、国外A公司和国内B公司的一步法反转定量试剂合成cDNA，使用我公司荧光定量检测试剂盒(染料法，货号：WH0110)检测小鼠RN5基因，展示扩增曲线、熔解曲线和标准曲线。结果显示，我公司5×Quicking RT SuperMix反转录得到的cDNA量大，扩增Ct靠前，特异性高，梯度优秀，特别对于低丰度模板的检测优于其他竞争试剂。

组分	25T	100T	1000T
5×Quicking RT SuperMix	100μL	400μL	10×400μL
RNase-Free ddH2O	1mL	2×1mL	20×1mL

保存：20℃可保存12个月。


请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

• 本制品的适宜模板量范围为50ng～2μg的总RNA，如果总RNA量大于2μg，请按比例扩大反应体系。
  
• 在冰上进行操作，防止发生RNA降解。
  
• 不需分开变性和退火两个步骤。但是对于二级结构很复杂的RNA模板，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5min后迅速转移到冰上，进行下一步操作。

使用Quicking一步法除基因组cDNA第一链合成预混试剂合成第一链cDNA，50ng～2μg的总RNA可建立20μL反应体系。

• 将模板RNA在冰上解冻；5×Quicking RT SuperMix和RNase-Free ddH2O在室温（15～25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
  以下操作步骤请在冰上进行。为了保证反应液配制的准确性，进行反应体系配制时，应先配制成Mix，然后再分装到每个反应管中。
  
• 按照下表所示配制反转录反应体系。
  

  成分	用量
  5×Quicking RT SuperMix	4μL
  Total RNA	50ng～2μg
  RNase-Free ddH2O	补足到20μL

  
  
• 按照下表所示进行反转录反应。
  

  反应温度	反应时间	说明
  42℃	15min	去除基因组及反转录反应
  95℃	3min	酶灭活过程

  注：
  
  • 若后续实验为实时荧光定量PCR，反转录产物的加量应不超过PCR体系终体积的1/10，例如50μL的PCR反应体系，反转录产物的加量应不超过5μL。
    
  • 将反转录产物置于冰上，再进行后续PCR反应；如果需要长时间保存，请置于-20℃下保存。

RNA模板质量控制：
反转录酶以RNA为模板合成第一链cDNA，因此模板RNA的质量直接影响反转录的结果。

• 模板的完整性：模板RNA的完整性对反转录非常重要，若RNA模板中含有RNase将降解模板RNA，最后导致cDNA产物的量少甚至无cDNA产物。
  
• 模板的纯度：若RNA模板中含有蛋白、盐离子、EDTA、乙醇、酚等杂质，将影响反转录酶的活性，最终影响反转录结果。如若含有基因组DNA将影响后续实验的准确性。
  
• 模板的加样量：以上操作步骤适用于模板RNA量为50ng～2μg，如果模板RNA的量大于2μg，请按比例扩大反应体系。

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